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第204章 医学泰斗（第1页）

第2o4章医学泰斗

孙长明就像个路过的npc，丢下几句毫无杀伤力的台词后就自己退场了。

关于无能的丈夫这一块……

陈浩还要说：“好像看见孙教授关门的时候捂着胸口，不会有事吧？”

易向晚：“没事，应当是受了点内伤，回去休养几天就好了，咱们继续工作吧。”

陈浩和易向晚，人走了还要补刀！

而且刚才正是陈浩一脸无辜地提出字字诛心的问题。

这个陈浩，怎么这么坏啊！

……

重新开始实验。

nanodrop上几组数据都很完美。

王晓晴乖巧请教：“江河，接下来怎么做？”

目前浓度和纯度虽然达标了，但mirna片段太短。

传统的逆转录实验，一般都是用o1igo（dt）引物去抓mrna尾巴上的po1y-a结构。

可是mirna根本没有这种长尾巴，常规的逆转录引物根本抓不住它。

这在o8年又是一个技术难题。

全世界的实验室都在寻找一种高效特异的办法，把这短短二十几个碱基的片段给稳定地逆转录出来。

江河道：“之前讲过茎环引物，当然，后入组的组员来得晚不知道，陈浩，你给大家简单讲讲。”

“ok啊。”

陈浩道：“这个引物分为两部分，后面是一个能够自我互补打折形成的茎环结构，它的作用是提供空间位阻，增加稳定性；前面伸出来一小段，大概6到8个碱基，这段序列和我们要抓的特异性mirna的3端完全互补。”

王晓晴点点头：“明白了，引物前端这几个碱基先跟mirna的尾巴精准结合，然后逆转录酶就可以用这个双链结构作为起始点，一路把mirna的互补链给合成出来。”

杨煦很想插嘴装逼。

可这一段江河还没教他。

他也不会啊。

只能悻悻放弃。

陈浩则感觉很爽。

——没想到吧！自己也有给教授上课的一天！

他笑了笑，接着说：

“不仅如此，茎环结构在室温下是折叠闭合的，只有在结合了目标mirna后才会打开，这会极大降低引物结合到其他杂质rna上的概率，特异性会呈指数级上升。”

陆晓林补充：“对了，引物序列老大已经设计好了，今天早上刚送到。”

他拉开旁边的一个抽屉，拿出一排装在冰盒里的离心管。

江河看了眼，点点头道：“现在配置逆转录体系，16度3o分钟让引物结合，42度3o分钟逆转录，最后85度5分钟灭活酶。”

“收到！”

一个多小时后。

逆转录程序跑完，酶被灭活。

接下来是最紧张的验证环节。

上机，跑qpcr（实时荧光定量pcr）。

众人屏息凝神，迅配好荧光定量体系，将满载着希望的八排管放进了旁边那台abi75oo定量pcr仪中。

显示器。

第18个循环。

荧光信号突然爆，拉出了一道完美平滑的扩增曲线！

一个多小时后，4o个扩增循环全部结束，机器进入最后的升温阶段。

紧接着跑出来的熔解曲线，呈现出极为漂亮的单一峰型！

这意味着，

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